當(dāng)前位置：RNA酶保護試驗方法分析
點擊次數(shù)：682 更新時間：2017-04-01
PⅢNP Elisa試劑盒RNA酶保護法是近十年發(fā)展起來的一種全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是將標(biāo)記的特異RNA探針(32P或)與待測的RNA樣品液相雜交，標(biāo)記的特異RNA探針按堿基互補的原則與目的基因特異性結(jié)合，形成雙鏈RNA;未結(jié)合的單鏈RNA經(jīng)RNA酶A或RNA酶T消化形成寡核糖核酸，而待測目的基因與特異RNA探針結(jié)合后形成雙鏈RNA，免受RNA酶的消化，故該方法命名為RNA酶保護實驗。
與Northern blot和RT-PCR比較，RPA有以下幾個優(yōu)點：
. 檢測靈敏度比Northern雜交高。由于Northern雜交步驟中轉(zhuǎn)膜和洗膜都將造成樣品和探針的損失，使靈敏度下降，而RPA將所有雜交體系進(jìn)行電泳，故損失小，PⅢNP Elisa試劑盒提高了靈敏度。
2. 由于PCR擴增過程中效率不均一和反應(yīng)“平臺”問題，基于PCR產(chǎn)物量進(jìn)行分析所得數(shù)據(jù)的可靠性將下降，而RPA沒有擴增過程，因此，分析的數(shù)據(jù)真實性較高。
3.由于與反義RNA探針雜交的樣品RNA僅為該RNA分子的部分片段，因此，部分降解的RNA樣品仍可進(jìn)行分析。
4.步驟較少，耗時短。與Northern雜交相比，省去了轉(zhuǎn)膜和洗膜的過程。
5. RNA-RNA雜交體穩(wěn)定性高，無探針自身復(fù)性問題，無須封閉。
6. 一個雜交體系中可同時進(jìn)行多個探針雜交，無競爭性問題。
7. PⅢNP Elisa試劑盒檢測分子長度可以任意設(shè)置，靈活性大。RPA的缺點是需要同位素標(biāo)記探針。
